猪巴氏杆菌病的诊断新乡

（一）临床与病理学诊断

剖检时最急性考试型病例通常不见显著病变或仅在咽喉部泛起出血性病变，急性的泛起咽喉炎，慢性病例为肺部有较陈旧的肺病灶，表面有出血雀斑，或有纤维素性肋膜炎，肺与肺常有粘连，肺切面呈大理石状，有红色和灰色肝变。同时必di现肺门淋巴结肿大、出血、坏死等炎症变化，其他各部淋巴结变化不明显。血液涂片镜检可见两端着色的巴氏杆菌，或可做细菌培养以确诊。

（二）病原学诊断

1．病料的采取与镜检 生前采取耳静脉血，剖检尸体时无菌采取水肿液、胸（腹）腔液、心血、肝、脾、淋巴结等组织。病料涂片，天然干燥后，用甲醇固定2～jmln，以碱性美蓝液染色1- 2min，或以瑞氏染液染色Smin，经水洗，干燥后镜检，发现两极浓染的杆菌；也可用革兰染色法。镜检如见有卵圆形短杆状、两极呈显著浓染、革兰阴性小球杆菌时，即可初步判断为巴氏杆菌。

2．细菌分离与鉴定 将新鲜病料接种加血红素马丁琼脂平板、血液琼脂平板和麦康凯琼脂平板，37℃培养24h后观察。多杀性巴氏杆菌在麦康凯培养 5基上不生长。在血液琼脂培养基上形成浅灰色、圆整、潮湿的露滴样小菌落，菌落附近不溶血。在马丁琼脂上形成直径2mm左右的菌落，在45。折射光下观察菌落具有特征性的虹光结构，假如菌落结构比较细致，以蓝绿色虹光为主，红光不强，即所谓对猪毒力强的Fg型；假如以橘红色虹光结构为主，蓝绿色虹光所占的面积少，而且不强，即为对猪毒力不强而对禽毒力强的Fo型。将可疑菌落移植于三糖铁培养基，叮生长并使三糖铁管底部变黄。此菌能分解葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖和甘露糖，产酸不产气，对鼠李糖及乳糖等不能分解。尿素酶试验阴性，靛基质试验阳性，硫化氢试验用醋酸铅纸条法阳性，石蕊牛乳无变化，不能液化明胶。

（三）动物接种试验

将病料研磨成糊状，以灭菌生理盐水制成1：10的悬液（或用肉汤培养基的24h培养物），接种于小白鼠、家兔的皮下或腹腔，接种量小白鼠为0.1 -0.3mL，家兔0.3-0.5mL。如用家兔接种日寸，世土种前数日，天天以0.2%～0.5 %煌绿2-3滴滴鼻，如巴氏杆菌带菌兔，则在滴鼻后18～24h泛起化脓性鼻炎， 这种家兔则不宜再作接种用。

如病料中含有巴氏杆菌强毒菌，小白鼠及家兔造纸胶辊最早在lOh左右死亡，一般在24-72h死亡，剖检u真l真吸道及消化道黏膜有出血点，脾脏不肿大，肝脏常见充血、肿大及坏死。试验动物死亡后，应立刻剖检，取其心血、肝、脾等脏器进行涂片镜检和分离培养。

（四）多杀性巴氏杆菌血清型鉴定

1．荚膜分型鉴定 可用间接血凝试验鉴定荚膜物质，将待检菌株接种于血液琼脂或马丁琼脂上，用3～4mL生理盐水洗下培养物，经56℃水浴处理30min（促进荚膜物质脱离菌体），再经离心，取上清液（荚膜提取液）作为致敏红细胞的抗原；若为黏液状菌落，可先用透明质酸酶处理，即用O.lmol/LpH为6.()的磷酸盐液缓冲刷下菌落后，在悬液中加15个国际配制方的睾丸透明质酸酶ImL，悬液置37℃水浴3-4h，然后56℃水浴处理30min，离心，取上清液作为致敏红细胞的抗原。按常规方法进行抗原致敏红细胞。致敏红细胞用生理盐水配制成0.50-/0悬液。正式试验是用生理盐水将A、B、D、E、Q血清在试目l：10，1：20， 40，1：80，l：160和1：320进行稀释，然后取各稀释度的抗血清0.25mL与等量的0.5%致敏红细胞混合，则抗血清的最后稀释度为1：20.1：40、1: 80 1:160, 1: 320和1 ：640，用力振摇试管架，使各成分允分混合，置室温约2h，观察结果。然后将试管再置室温过夜，第二次观察结果。阳性反应者泛起显著的凝集。

2．菌体血清群抗原的鉴定 用琼脂扩散试验鉴定菌体血清型。试验首先是将待检菌株接种于葡萄糖淀粉琼脂平板培养登山鞋18h，将菌体浓厚的悬液悬浮于ImL的0.3%甲醛生理盐水中，在水浴中加热全100℃经th，离心沉淀，上清液作为抗原。凝胶制备方法是用8.5%氯化钠溶液加入l %琼脂和0.0l%硫柳汞，琼脂溶化、倒板、打孔按常规方法。试验时尺度抗血清滴在外周孔，待检抗原滴在中间孔，加样完毕后，置37℃24-48h判断，有显著沉淀线者判为阳性。

（五）鉴别诊蹦床断

临床上，应留意与猪接触性传染性肋膜肺炎、猪副嗜血杆菌病、猪气喘病、猪瘟、猪丹毒、仔猪副伤寒、链球菌病等进行鉴别。